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Puromycin是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基核苷类抗生素,中文名为嘌呤霉素,常用于筛选通过质粒转染/转化、病毒感染等方法能表达pac基因的真核或原核多克隆或单克隆细胞。Puromycin不仅用于稳定细胞株的筛选,也用于稳定细胞株的维持。嘌呤霉素通过抑制蛋白质合成而抑制或杀死细胞。它具有与tRNA分子末端类似的结构,能够同氨基酸结合,代替氨酰化的tRNA同核糖体的A位点结合,并掺入到生长的肽链中,但不会参与随后的任何反应, 因而导致蛋白质合成的终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟的多肽。

产品编号

产品名称

规格

单位

价格(元)

Ms-puro-001

Puromycin(10mg/ml)

1ml

支

500

 

稳定细胞株的筛选--嘌呤霉素

1、将待筛选细胞接种于 48 孔板中至 70-80%融合度
2、待细胞贴壁后,加入嘌呤霉素(0, 1, 2.5, 5, 10μg/ml)进行筛选。
3、得出药物处理 48h 后细胞全部死亡的最低药物浓度
4、将细胞种植在24 孔板中,贴壁后进行慢病毒感染,感染第二天,加入 puromycin药物筛选
5、筛选后的细胞即时观察荧光判断是否获得感染效率 100%的细胞


A、将细胞消化后,接种于 96 或者 384 孔板中,保证接种的 细胞密度为 1 个/孔,接下来的步骤详见步骤 7、步骤 8

B、同时接种细胞于6孔板(10 cell/well)或6cm dish(10 cell/well), 接下来的步骤详见步骤 9

7、接种后第二天观察孔板,标记出具有单个细胞的孔
8、继续培养标记孔的细胞,中间隔 2-3 天换液,待孔板中细胞 长至细胞克隆时,挑取单个细胞克隆孔板中的细胞进行扩大,多 挑几个这样的孔扩大,至 24 孔板,再逐级放大,直至获得需要 的细胞量
9、继续培养细胞,中间隔 2-3 天换液,待板中细胞长至肉眼可 见细胞克隆时,挑取单个细胞克隆进行扩大,多挑几个这样的孔 扩大,至 24 孔板,再逐级放大,直至获得需要的细胞量。

 

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